图1为对比实施例1得到的包被板检测高低值质控品的结果，

图2为实施例1得到的包被板检测高低值质控品的结果。

为了更好的理解本发明，下面结合具体实施例来进一步说明。

对比实施例1

常规的包被板封闭液，其组分和浓度为：

BSA                       5g/L

吐温-20(Tween-20)           5g/L

叠氮钠                     1g/L

包被板封闭液使用方法：

首先，把抗原或抗体以pH7.4 0.02mol/L的磷酸盐缓冲液稀释成一定浓度；其次，按100μL/孔加入稀释好的包被液，在37℃下包被2小时；然后，弃去包被板内的包被液，将包被板拍干后，按100μL～300μL /孔加入上述配制好的包被板封闭液，在2～8℃下包被16～20小时；最后，弃去包被板内的封闭液，将包被板拍干后，放置于湿度小于30％的35～39℃干燥箱中烘干4～6小时即可。

常规实验包被的丙型肝炎核心抗原(HCV)单抗建立的丙型肝炎核心抗原检测试剂盒（ELISA）包括以下步聚：

1、以抗HCV单抗包被白色微孔板，包被浓度为 5μg/ml，100μL / 孔，37℃包被2小时，洗板后，以包被板封闭液按200μL / 孔 4℃包被8小时后，弃去包被板内的封闭液，拍干后，放置于湿度为25％的 37℃干燥箱中烘干4小时；再把多个包被好的包被板分别放置于37℃的恒温箱中3天、7 天、15 天、30 天、60 天后取出，与2～8℃存放的包被板平行比较；

2、设定好加样孔，将50μl 系列HCV定标品和质控品 QCL（低浓度）、QCH（高浓度）加在存放在2～8℃的HCV包被板和分别放置于 37℃的恒温箱中 3 天、7 天、15 天、30 天、60 天破坏后的HCV包被板上，再加 50μl 稀释抗HCV单抗-HRP 酶结合物，37℃反应 1 小时后，洗板 5 次，拍干；

3、每孔加入显色液 A 液和 B 液各 50uL，避光 37℃显色 15min；

4、每孔加入终止液各 50uL，用酶标仪在波长 450nm/630nm 处读取吸光度（OD）值。

检测结果如下表1所示：

表1 不同存放条件检测各个浓度标准品的OD值

定义检测0pg含量的标准品所得的OD值为空白吸光度值，用实施例1操作制备的包被板空白吸光度为0.1。通过对比的实验数据，常规封闭液封闭的包被板在37℃环境下存放15天已经出现破坏，相关系数已经低于0.99。

同样的结论也表现在测定质控品的结果上，分别放置于37℃的恒温箱中3天、7 天、15 天、30 天、60 天的包被板检测高低值质控品的结果如图1所示：

    包被板在37℃的恒温箱中放置15天后，检测结果明显降低，说明此时包被板上抗体的生物活性受到了很大影响。

实施例1

以本发明实施例包被的丙型肝炎核心抗原(HCV)单抗建立的丙型肝炎核心抗原检测试剂盒（ELISA）步骤与对比实施例1相同，区别在于步骤1中包被板封闭液的组分为：

Tris-HCl缓冲液（pH=7.4）   0.1mol/L，

PEG-20000                  1g/L，

吐温-20(Tween-20)           5g/L，

海藻糖                     10g/L，

叠氮钠                     1g/L。

弃去包被板内的包被液，将包被板拍干后，按100μL～300μL /孔加入上述配制好的包被板封闭液，在37℃下包被2小时；其余操作同对比实施例1中操作相同。检测结果如下表2所示。

表2 不同存放条件检测各个浓度标准品的OD值

通过实验数据，应用实施例2制备的包被板空白吸光度为0.056左右，比实施例1中得空白吸光度要低很多，因此应用实施例2制备的封闭液能有效降低包被板的本底吸光度，并且包被时间大大缩短了，提高了工作效率。通过2～8℃和37℃存放对比的实验数据，本发明封闭液封闭的包被板在37℃环境下能稳定存放60天不出现破坏，相关系数依旧维持在0.99以上，达到试剂盒的要求。

通过检测质控品，验证应用实施例2封闭的包被板能够稳定存放的时间。分别利用放置于37℃的恒温箱中3天、7 天、15 天、30 天、60 天的包被板检测高低值质控品，检测结果如图2所示。

通过图2检测质控品结果变化的趋势，利用实施例2封闭的包被板在37℃的恒温箱中放置60天检测结果还是没有太大变化，说明本发明实施例2中的封闭液处理后的包被板能长久保证表面抗体的生物活性。

对比实施例2

以本发明实施例包被的丙型肝炎核心抗原(HCV)单抗建立的丙型肝炎核心抗原检测试剂盒（ELISA）步骤与实施例1相同，区别在于步骤1中包被板封闭液的组分为：

Tris-HCl缓冲液（pH=7.4）   0.1mol/L，

吐温-20(Tween-20)           5g/L，

海藻糖                     10g/L，

叠氮钠                     1g/L。

表3 对比实施例2检测结果

对比实施例3

以本发明实施例包被的丙型肝炎核心抗原(HCV)单抗建立的丙型肝炎核心抗原检测试剂盒（ELISA）步骤与实施例1相同，区别在于步骤1中包被板封闭液的组分为：

包被板封闭液的组分为：

Tris-HCl缓冲液（pH=7.4）   0.1mol/L，

PEG-20000                  1g/L，

吐温-20(Tween-20)           5g/L，

叠氮钠                     1g/L。

表4 对比实施例3检测结果

通过实验数据，实施例1与对比实施例1、2、3制备的包被板可知：在不应用BSA封闭的情况下，试剂空白吸光度会比较低；封闭液中在同时加入大分子物质和海藻糖的情况下，制备的包被板在37℃环境下能稳定存放60天不出现破坏，相关系数依旧维持在0.99以上，如果单独加入大分子物质或海藻糖就无法达到上述要求。

实施例2

以本发明实施例包被的丙型肝炎核心抗原(HCV)单抗建立的丙型肝炎核心抗原检测试剂盒（ELISA）步骤与实施例1相同，区别在于步骤1中包被板封闭液的组分为：

Tris-HCl缓冲液（pH=7.4）   0.01mol/L，

聚乙烯吡咯烷酮             0.5g/L，

吐温-20(Tween-20)           0.5g/L，

海藻糖                     1g/L，

叠氮钠                     0.1g/L。

实验操作流程同实施例1中所述步骤。

实施例3

以本发明实施例包被的丙型肝炎核心抗原(HCV)单抗建立的丙型肝炎核心抗原检测试剂盒（ELISA）步骤与实施例1相同，区别在于步骤1中包被板封闭液的组分为：

Tris-HCl缓冲液（pH=7.4）   0.05mol/L，

PEG-20000                  0.5g/L，

聚乙烯吡咯烷酮             0.5g/L，

吐温-20(Tween-20)           1g/L，

海藻糖                     5g/L，

叠氮钠                     0.5g/L。

实验操作流程同实施例1中所述步骤。

利用实施例2、实施例3、实施例4中的封闭液处理的包被板，分别放置于37℃的恒温箱中 1天、3 天、7 天、15 天、30 天、60 天破坏后，对质控品 QCL（低浓度）、QCH（高浓度）进行检测的结果如表 5所示：

表5实施例2、3、4检测结果对比

    经过对比实施例2、实施例3、实施例4质控品检测结果，三种实施例测得的结果偏差不大，因此三种配方的封闭液都可以达到试剂盒的要求。

经过实验证明，本发明的无蛋白封闭液不但能够与包被板表面上的空白位置结合，对包被板起到封闭效果，而且在包被板离开低温环境后能够更长时间地保持其表面抗原/抗体的生物活性，能达到降低本底且稳定包被板的效果。