本发明涉及一种稳定性强的乳酸检测试剂，属于临床体外检测技术领域。

血乳酸（LAC）是体内糖代谢的中间产物，主要由红细胞、横纹肌和脑组织产生，血液中的乳酸浓度主要取决于肝脏及肾脏的合成速度和代谢率。在某些病理情况下（如呼吸衰竭或循环衰竭时），可引起组织缺氧，由于缺氧可引起体内乳酸升高。另外，体内葡萄糖代谢过程中，如糖酵解速度增加，剧烈运动、脱水时，也可引起体内乳酸升高，体内乳酸升高可引起乳酸中毒。

乳酸中毒分为A、B 两种类型：A 型(有组织低氧血症的临床证据)，包括休克(心源性、脓毒性、低血容量性)、严重低氧血症、Co 中毒及严重哮喘；B 型(无组织低氧症的临床证据)，其中包括糖尿病、肝病脓毒症等与基础病症有关的乳酸中毒，另外还包括乙醇、甲醇、硝普钠等药物和毒素引起的乳酸中毒。因此检查体内血乳酸水平至关重要，可提示潜在疾病的严重程度。

乳酸检测方法较多，目前应用的测试方法有YSI血乳酸分析仪测试法、分光光度法，比色法和酶学测定法等。但是由于YSI血乳酸分析仪测试法、分光光度法和比色法三种方法分析灵敏度不是很高，容易受其他成分的干扰，因此现在医院和科研机构多使用酶法进行检测，这种方法试剂分析灵敏度高，结合全自动生化分析仪器操作方便，成本合理，多为人们所接受。但是液态试剂中需要加入部分酶参与反应，其中加入的过氧化物酶对底物的专一性差，干扰反应严重，分析准确度差。此外，试剂中的乳酸氧化酶，在液体状态下不稳定，在温度偏高的情况下容易失活，若果增加乳酸氧化酶的量，必然会增加成本，为产品的推广带来很大的影响。

为克服现有技术中存在的问题，本发明提供了一种稳定性强的乳酸检测试剂。

本发明所采用的技术方案是：

一种稳定性强的乳酸检测试剂，其特征在于，它包括试剂R1和试剂R2；所述试剂R1各组分为：

Tris缓冲液(pH=7.4)                       100mmol/L 

EDTA.Na2                           10mmol/L -100mmol/L

乙酸锰（Ⅲ）                         10μmol/L-100μmol/L

过氧化物酶                            2KU/L-20KU/L

抗坏血酸酶                             2KU/L-8KU/L  

 对羟基苯甲酸                             1mol/L

氯化钠                                   2.5g/L-10g/L

叠氮钠                                   1g/L-5g/L

4-氨基安替比林                           0.25mmol/L；

所述试剂R2各组分为：

PIPES（1,4-哌嗪二乙磺酸）缓冲液(pH=7.4)     50mmol/L 

EDTA.Na2                           10mmol/L-100 mmol/L

纳米粒子                                 5-30mmol/L

脂肪醇聚氧乙烯醚                          1g/L- 10g/L

明胶                                       1g/L-10g/L

乳酸氧化酶D                             2KU/L-8KU/L  

氯化钠                                   2.5g/L-10 g/L

叠氮钠                                     1g/L-5 g/L。

所述纳米粒子为γ-Fe2O3纳米粒子，粒径为5-30nm。

作为本发明的一种优选组分，所述试剂R1各组分为：

Tris缓冲液(pH=7.4)                       100mmol/L 

EDTA.Na2                               50mmol/L

乙酸锰（Ⅲ）                            60μmol/L

过氧化物酶                              10KU/L

抗坏血酸酶                               6KU/L  

 对羟基苯甲酸                             1mol/L

氯化钠                                    6g/L

叠氮钠                                    3g/L

   4-氨基安替比林                           0.25mmol/L。

作为本发明的另一种优选组分，所述试剂R2中各组分：

1,4-哌嗪二乙磺酸缓冲液(pH=7.4)           50mmol/L 

EDTA.Na2                               50 mmol/L

纳米粒子                                 20mmol/L

脂肪醇聚氧乙烯醚                          6g/L

明胶                                       6g/L

乳酸氧化酶D                               6KU/L  

氯化钠                                     8 g/L

叠氮钠                                     3 g/L。

本发明所述的γ-Fe2O3纳米粒子是采用常规微乳-水热法或超声沉淀法合成。

本发明的有益效果是：

1、本发明采用对羟基苯甲酸作为反应的新型色原，其本身不易分解，在试剂中的稳定性强，检测效果好，且成本低廉。试剂R1中添加了具有氧化性的乙酸锰（Ⅲ），该物质可有效出去胆红素、头孢类、维生素C等还原性物质的干扰。

2、在试剂R2中通过加入γ-Fe2O3纳米粒子增强了过氧化物酶的活性以及对底物的专一性，减少了抗坏血酸、尿酸、谷胱甘肽及胆红素等还原性物质的干扰，同时γ-Fe2O3纳米粒子还作为反应的催化剂，与过氧化物酶共同作用催化Trinder反应，使得反应进行的更彻底，提高了检测准确度及灵敏度。

3、本发明配方中试剂R1选用Tris- EDTA.Na2(pH=7.4)缓冲液，试剂R2中选用PIPES- EDTA.Na2生物缓冲液 (pH=7.4)，两种缓冲液缓冲能力强，配合使用效果好，对反应体系不会产生任何干扰且对反应的酶的活性也没有任何抑制作用，因而构成了一种稳定的缓冲体系。

4、本发明在试剂R2中同时加入明胶和脂肪醇聚氧乙烯醚两种表面活性剂，明胶主要为氨基酸组成相同而分子量分布很宽的多肽分子混合物，具有优良的胶体保护性、表面活性、稳定性和水易溶性，而脂肪醇聚氧乙烯醚则是一种长链的非离子表面活性剂，能够有效的包裹和保护乳酸氧化酶的活性基团，从而减缓乳酸氧化酶的失活，这两种表面活性剂的加入为乳酸氧化酶的存在提供了良好的稳定空间，尤其是在抵抗温度相对偏高的环境下，效果较好。 

图1是本发明实施例1-4所得试剂7天37℃热稳定性验证结果；

图2是本发明实施例1-4所得试剂15天开瓶稳定性验证结果；

图3是本发明实施例1所得试剂与对照组试剂检测结果线性相关图；

图4是本发明实施例2所得试剂与对照组试剂检测结果线性相关图；

图5是本发明实施例3所得试剂与对照组试剂检测结果线性相关图；

其中，图1中1-4分别为实施例1-4低值质控结果，5-8分别为实施例1-4高值质控结果；图2中1-4分别为实施例1-4低值质控结果，5-8分别为实施例1-4高值质控结果。