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著录项
摘要
本发明公开了一种稳定性强的乳酸检测试剂,属于临床体外检测技术领域。本发明试剂包括试剂R1和试剂R2两种组分,各组分中物质合理搭配使用,使整个试剂体系处于一种稳定状态,与常规乳酸检测试剂相比,本发明试剂具有更加优异的稳定性效果,利于临床的推广使用。
法律状态
法律状态公告日 | 20230103 |
法律状态 | 专利申请权、专利权的转移 |
法律状态信息 | 专利权的转移 IPC(主分类):C12Q 1/28 专利号:ZL2014106977528 登记生效日:20221222 变更事项:专利权人 变更前权利人:孟怡然 变更后权利人:孟怡然 变更事项:地址 变更前权利人:250200 山东省济南市章丘五中高二17班 变更后权利人:250200 山东省济南市章丘五中高二17班 变更事项:专利权人 变更前权利人: 变更后权利人:山东博科生物产业有限公司 |
法律状态公告日 | 20160914 |
法律状态 | 授权 |
法律状态信息 | 授权 |
法律状态公告日 | 20160824 |
法律状态 | 著录事项变更 |
法律状态信息 | 著录事项变更 IPC(主分类):C12Q 1/28 变更事项:发明人 变更前:甘宜梧 罗维晓 谭柏清 王绮 李静 肖慧 朱玉娥 变更后:孟怡然 |
法律状态公告日 | 20160824 |
法律状态 | 专利申请权、专利权的转移 |
法律状态信息 | 专利申请权的转移 IPC(主分类):C12Q 1/28 登记生效日:20160805 变更事项:申请人 变更前权利人:山东博科生物产业有限公司 变更后权利人:孟怡然 变更事项:地址 变更前权利人:250200 山东省济南市章丘市明水经济开发区山东博科产业园 变更后权利人:250200 山东省济南市章丘五中高二17班 |
法律状态公告日 | 20150401 |
法律状态 | 实质审查的生效 |
法律状态信息 | 实质审查的生效 IPC(主分类):C12Q 1/28 申请日:20141128 |
法律状态公告日 | 20150304 |
法律状态 | 公开 |
法律状态信息 | 公开 |
事务数据公告日 | 20230103 |
事务数据类型 | 专利申请权、专利权的转移 |
转让详情 | 专利权的转移 IPC(主分类):C12Q 1/28 专利号:ZL2014106977528 登记生效日:20221222 变更事项:专利权人 变更前权利人:孟怡然 变更后权利人:孟怡然 变更事项:地址 变更前权利人:250200 山东省济南市章丘五中高二17班 变更后权利人:250200 山东省济南市章丘五中高二17班 变更事项:专利权人 变更前权利人: 变更后权利人:山东博科生物产业有限公司 |
事务数据公告日 | 20160824 |
事务数据类型 | 专利申请权、专利权的转移 |
转让详情 | 专利申请权的转移 IPC(主分类):C12Q 1/28 登记生效日:20160805 变更事项:申请人 变更前权利人:山东博科生物产业有限公司 变更后权利人:孟怡然 变更事项:地址 变更前权利人:250200 山东省济南市章丘市明水经济开发区山东博科产业园 变更后权利人:250200 山东省济南市章丘五中高二17班 |
权利要求
权利要求数量(4)
独立权利要求数量(1)
1.一种稳定性强的乳酸检测试剂,其特征在于,它包括试剂R1和试剂R2;所述试剂R1各组分为:
Tris缓冲液(pH=7.4) 100mmol/L
EDTA.Na 2 10mmol/L -100mmol/L
乙酸锰(Ⅲ) 10μmol/L-100μmol/L
过氧化物酶 2KU/L-20KU/L
抗坏血酸酶 2KU/L-8KU/L
对羟基苯甲酸 1mol/L
氯化钠 2.5g/L-10g/L
叠氮钠 1g/L-5g/L
4-氨基安替比林 0.25mmol/L;
所述试剂R2各组分为:
PIPES(1,4-哌嗪二乙磺酸)缓冲液(pH=7.4) 50mmol/L
EDTA.Na 2 10mmol/L-100 mmol/L
纳米粒子 5-30mmol/L
脂肪醇聚氧乙烯醚 1g/L- 10g/L
明胶 1g/L-10g/L
乳酸氧化酶D 2KU/L-8KU/L
氯化钠 2.5g/L-10 g/L
叠氮钠 1g/L-5 g/L。
2.根据权利要求1所述的乳酸检测试剂,其特征在于,所述纳米粒子为γ-Fe 2O 3纳米粒子,粒径为5-30nm。
3.根据权利要求1所述的乳酸检测试剂,其特征在于,所述试剂R1各组分为:
Tris缓冲液(pH=7.4) 100mmol/L
EDTA.Na 2 50mmol/L
乙酸锰(Ⅲ) 60μmol/L
过氧化物酶 10KU/L
抗坏血酸酶 6KU/L
对羟基苯甲酸 1mol/L
氯化钠 6g/L
叠氮钠 3g/L
4-氨基安替比林 0.25mmol/L。
4.根据权利要求1所述的乳酸检测试剂,其特征在于,所述试剂R2中各组分:
1,4-哌嗪二乙磺酸缓冲液(pH=7.4) 50mmol/L
EDTA.Na 2 50 mmol/L
纳米粒子 20mmol/L
脂肪醇聚氧乙烯醚 6g/L
明胶 6g/L
乳酸氧化酶D 6KU/L
氯化钠 8 g/L
叠氮钠 3 g/L。
说明书
本发明涉及一种稳定性强的乳酸检测试剂,属于临床体外检测技术领域。
血乳酸(LAC)是体内糖代谢的中间产物,主要由红细胞、横纹肌和脑组织产生,血液中的乳酸浓度主要取决于肝脏及肾脏的合成速度和代谢率。在某些病理情况下(如呼吸衰竭或循环衰竭时),可引起组织缺氧,由于缺氧可引起体内乳酸升高。另外,体内葡萄糖代谢过程中,如糖酵解速度增加,剧烈运动、脱水时,也可引起体内乳酸升高,体内乳酸升高可引起乳酸中毒。
乳酸中毒分为A、B 两种类型:A 型(有组织低氧血症的临床证据),包括休克(心源性、脓毒性、低血容量性)、严重低氧血症、Co 中毒及严重哮喘;B 型(无组织低氧症的临床证据),其中包括糖尿病、肝病脓毒症等与基础病症有关的乳酸中毒,另外还包括乙醇、甲醇、硝普钠等药物和毒素引起的乳酸中毒。因此检查体内血乳酸水平至关重要,可提示潜在疾病的严重程度。
乳酸检测方法较多,目前应用的测试方法有YSI血乳酸分析仪测试法、分光光度法,比色法和酶学测定法等。但是由于YSI血乳酸分析仪测试法、分光光度法和比色法三种方法分析灵敏度不是很高,容易受其他成分的干扰,因此现在医院和科研机构多使用酶法进行检测,这种方法试剂分析灵敏度高,结合全自动生化分析仪器操作方便,成本合理,多为人们所接受。但是液态试剂中需要加入部分酶参与反应,其中加入的过氧化物酶对底物的专一性差,干扰反应严重,分析准确度差。此外,试剂中的乳酸氧化酶,在液体状态下不稳定,在温度偏高的情况下容易失活,若果增加乳酸氧化酶的量,必然会增加成本,为产品的推广带来很大的影响。
为克服现有技术中存在的问题,本发明提供了一种稳定性强的乳酸检测试剂。
本发明所采用的技术方案是:
一种稳定性强的乳酸检测试剂,其特征在于,它包括试剂R1和试剂R2;所述试剂R1各组分为:
Tris缓冲液(pH=7.4) 100mmol/L
EDTA.Na2 10mmol/L -100mmol/L
乙酸锰(Ⅲ) 10μmol/L-100μmol/L
过氧化物酶 2KU/L-20KU/L
抗坏血酸酶 2KU/L-8KU/L
对羟基苯甲酸 1mol/L
氯化钠 2.5g/L-10g/L
叠氮钠 1g/L-5g/L
4-氨基安替比林 0.25mmol/L;
所述试剂R2各组分为:
PIPES(1,4-哌嗪二乙磺酸)缓冲液(pH=7.4) 50mmol/L
EDTA.Na2 10mmol/L-100 mmol/L
纳米粒子 5-30mmol/L
脂肪醇聚氧乙烯醚 1g/L- 10g/L
明胶 1g/L-10g/L
乳酸氧化酶D 2KU/L-8KU/L
氯化钠 2.5g/L-10 g/L
叠氮钠 1g/L-5 g/L。
所述纳米粒子为γ-Fe2O3纳米粒子,粒径为5-30nm。
作为本发明的一种优选组分,所述试剂R1各组分为:
Tris缓冲液(pH=7.4) 100mmol/L
EDTA.Na2 50mmol/L
乙酸锰(Ⅲ) 60μmol/L
过氧化物酶 10KU/L
抗坏血酸酶 6KU/L
对羟基苯甲酸 1mol/L
氯化钠 6g/L
叠氮钠 3g/L
4-氨基安替比林 0.25mmol/L。
作为本发明的另一种优选组分,所述试剂R2中各组分:
1,4-哌嗪二乙磺酸缓冲液(pH=7.4) 50mmol/L
EDTA.Na2 50 mmol/L
纳米粒子 20mmol/L
脂肪醇聚氧乙烯醚 6g/L
明胶 6g/L
乳酸氧化酶D 6KU/L
氯化钠 8 g/L
叠氮钠 3 g/L。
本发明所述的γ-Fe2O3纳米粒子是采用常规微乳-水热法或超声沉淀法合成。
本发明的有益效果是:
1、本发明采用对羟基苯甲酸作为反应的新型色原,其本身不易分解,在试剂中的稳定性强,检测效果好,且成本低廉。试剂R1中添加了具有氧化性的乙酸锰(Ⅲ),该物质可有效出去胆红素、头孢类、维生素C等还原性物质的干扰。
2、在试剂R2中通过加入γ-Fe2O3纳米粒子增强了过氧化物酶的活性以及对底物的专一性,减少了抗坏血酸、尿酸、谷胱甘肽及胆红素等还原性物质的干扰,同时γ-Fe2O3纳米粒子还作为反应的催化剂,与过氧化物酶共同作用催化Trinder反应,使得反应进行的更彻底,提高了检测准确度及灵敏度。
3、本发明配方中试剂R1选用Tris- EDTA.Na2(pH=7.4)缓冲液,试剂R2中选用PIPES- EDTA.Na2生物缓冲液 (pH=7.4),两种缓冲液缓冲能力强,配合使用效果好,对反应体系不会产生任何干扰且对反应的酶的活性也没有任何抑制作用,因而构成了一种稳定的缓冲体系。
4、本发明在试剂R2中同时加入明胶和脂肪醇聚氧乙烯醚两种表面活性剂,明胶主要为氨基酸组成相同而分子量分布很宽的多肽分子混合物,具有优良的胶体保护性、表面活性、稳定性和水易溶性,而脂肪醇聚氧乙烯醚则是一种长链的非离子表面活性剂,能够有效的包裹和保护乳酸氧化酶的活性基团,从而减缓乳酸氧化酶的失活,这两种表面活性剂的加入为乳酸氧化酶的存在提供了良好的稳定空间,尤其是在抵抗温度相对偏高的环境下,效果较好。
图1是本发明实施例1-4所得试剂7天37℃热稳定性验证结果;
图2是本发明实施例1-4所得试剂15天开瓶稳定性验证结果;
图3是本发明实施例1所得试剂与对照组试剂检测结果线性相关图;
图4是本发明实施例2所得试剂与对照组试剂检测结果线性相关图;
图5是本发明实施例3所得试剂与对照组试剂检测结果线性相关图;
其中,图1中1-4分别为实施例1-4低值质控结果,5-8分别为实施例1-4高值质控结果;图2中1-4分别为实施例1-4低值质控结果,5-8分别为实施例1-4高值质控结果。
价值度评估
技术价值
经济价值
法律价值
0 0 056.0分
0 50 75 100专利价值度是通过科学的评估模
型对专利价值进行量化的结果,
基于专利大数据针对专利总体特
征指标利用计算机自动化技术对
待评估专利进行高效、智能化的
分析,从技术、经济和法律价值
三个层面构建专利价值评估体
系,可以有效提升专利价值评估
的质量和效率。
总评:56.0分
该专利价值中等 (仅供参考)
技术价值 29.0
该指标主要从专利申请的著录信息、法律事件等内容中挖掘其技术价值,专利类型、独立权利要求数量、无效请求次数等内容均可反映出专利的技术性价值。 技术创新是专利申请的核心,若您需要进行技术借鉴或寻找可合作的项目,推荐您重点关注该指标。
部分指标包括:
授权周期(发明)
21 个月独立权利要求数量
0 个从属权利要求数量
0 个说明书页数
7 页实施例个数
0 个发明人数量
1 个被引用次数
0 次引用文献数量
0 个优先权个数
0 个技术分类数量
3 个无效请求次数
0 个分案子案个数
0 个同族专利数
0 个专利获奖情况
无保密专利的解密
否经济价值 8.0
该指标主要指示了专利技术在商品化、产业化及市场化过程中可能带来的预期利益。 专利技术只有转化成生产力才能体现其经济价值,专利技术的许可、转让、质押次数等指标均是其经济价值的表征。 因此,若您希望找到行业内的运用广泛的热点专利技术及侵权诉讼中的涉案专利,推荐您重点关注该指标。
部分指标包括:
申请人数量
1申请人类型
个人许可备案
0 次权利质押
0 次权利转移
2 个海关备案
否法律价值 19.0
该指标主要从专利权的稳定性角度评议其价值。专利权是一种垄断权,但其在法律保护的期间和范围内才有效。 专利权的存续时间、当前的法律状态可反映出其法律价值。故而,若您准备找寻权属稳定且专利权人非常重视的专利技术,推荐您关注该指标。
部分指标包括:
存活期/维持时间
9法律状态
有权-审定授权